菌種的(de)制備是指将保存的(de)菌種進行活化(huà),再經搖瓶或種子罐等逐級擴大(dà)的(de)過程。種子擴大(dà)培養增加菌體的(de)數量,滿足工業化(huà)生産對(duì)大(dà)量菌種的(de)需求。菌體達到一定濃度不僅是高(gāo)效率和(hé)高(gāo)質量生産的(de)保證,而且是縮短發酵周期、降低生産成本的(de)必然要求。種子擴大(dà)培養可(kě)以提升種子生産性能。首先,通(tōng)過營養物(wù)質的(de)充分(fēn)供應和(hé)适宜環境的(de)控制,可(kě)激發菌體的(de)新陳代謝活力,讓菌體生長(cháng)代謝旺盛;其次,在擴大(dà)培養過程中通(tōng)過調節培養基組成、發酵溫度、pH等因素逐步向生産階段的(de)真實環境逼近,調理(lǐ)菌體的(de)代謝,讓菌體在快(kuài)速增殖的(de)同時(shí)使菌體的(de)各項生理(lǐ)性能向最适宜生産需要的(de)方向趨近。菌種經過擴大(dà)培養後,以優勢菌進行生産,可(kě)以減小雜(zá)菌污染概率,減少“倒罐”現象,這(zhè)是成功生産的(de)保障。
菌種是從事微生物(wù)學及生命科學研究的(de)基本資料,因此,菌種保藏是一項重要的(de)基礎性工作。菌種保藏主要是根據微生物(wù)的(de)生理(lǐ)生化(huà)特點,人(rén)工創造條件,使孢子或菌體的(de)生長(cháng)代謝活動盡量降低,以減少其變異。
需要的(de)器材與試劑
1.器材
恒溫培養箱,恒溫搖床,250mL錐形瓶,無菌移液器,接種環,無菌甘油,無菌離心管(5mL)等。
2.試劑
菌種:酵母(Candida sp.)。
培養基:葡萄糖20.0g/L,酵母膏6.0g/L,磷酸二氫鉀5.0g/L,硫酸鎂0.25g/L,pH 5;固體培養基另加瓊脂20g/L。
菌種的(de)培養和(hé)保藏
1.菌種的(de)活化(huà)
将冰箱保藏的(de)斜面菌種用(yòng)接種環轉接入新鮮的(de)斜面培養基後,28℃恒溫培養48h。如果冰箱保藏菌種活力較低,可(kě)以重複上述操作進行多(duō)次傳代培養,以恢複菌種的(de)活力。
2.菌種的(de)擴大(dà)培養
将活化(huà)好的(de)酵母菌轉接入裝有液體培養基的(de)錐形瓶中,250mL錐形瓶中的(de)裝液量爲30~50mL,接種量爲一環;在恒溫搖床裏28℃恒溫振蕩培養48h,搖床轉速爲170~200r/min。
3.菌種的(de)保藏
(1)斜面保藏 将恢複生長(cháng)活力的(de)斜面菌種放入冰箱中進行低溫保藏。要求在30天左右進行傳代複活培養。
(2)甘油保藏 用(yòng)無菌移液器取2mL生長(cháng)良好的(de)發酵液,于超淨工作台上轉入無菌離心管中,然後加入1mL無菌甘油,蓋緊頂蓋後于振動器上将甘油和(hé)發酵液混合均勻。迅速置于-70℃冷(lěng)凍保藏