水(shuǐ)浴鍋在DNA片段的(de)純化(huà)與回收中的(de)應用(yòng)
1.從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段
(1)柱平衡步驟:向吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管中)加入500μl的(de)平衡液BL,12000rpm離心1min,倒掉收集管中的(de)廢液,将吸附柱重新放回收集管中。
(2)将單一的(de)目的(de)DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下(xià)(盡量切除多(duō)餘部分(fēn))放入幹淨的(de)離心管中,稱取重量。
(3)向膠塊中加入等倍體積溶液PC,50℃水(shuǐ)浴鍋放置10min,其間不斷溫和(hé)地上下(xià)翻轉離心管,以确保膠塊充分(fēn)溶解。
(4)将上一步所得(de)溶液加入一個(gè)吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管中),12000rpm離心1min,倒掉收集管中的(de)廢液,将吸附柱CB2放入收集管中。
(5)向吸附柱CB2中加入500μl漂洗液PW,12000rpm離心1min,倒掉收集管中的(de)廢液,将吸附柱CB2放入收集管中。
(6)重複操作步驟(5)。
(7)将吸附柱CB2放入收集管中,12000rpm離心2min,盡量除去漂洗液。将吸附柱置于室溫放置數分(fēn)鐘(zhōng),徹底晾幹。
(8)将吸附柱CB2放入一個(gè)幹淨的(de)離心管中,向吸附膜的(de)中間位置懸空滴加适量的(de)洗脫緩沖液EB,室溫放置2min。
(9)12000rpm離心2min,收集DNA溶液。
2.從PCR反應液或酶切反應液中回收DNA
(1)柱平衡步驟:向吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管中)加入500μl的(de)平衡液BL,12000rpm離心1min,倒掉收集管中的(de)廢液,将吸附柱重新放回收集管中。
(2)估計PCR反應液或酶切反應液的(de)體積,向其中加入等倍體積溶液PC,充分(fēn)混勻。
(3)将上一步所得(de)溶液加入一個(gè)吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管中),室溫放置2min,12000rpm離心1min,倒掉收集管中的(de)廢液,将吸附柱放入收集管中。
(4)向吸附柱CB2中加入500μl漂洗液PW,12000rpm離心1min,倒掉收集管中的(de)廢液,将吸附柱CB2放入收集管中。
(5)重複操作步驟(4)。
(6)将吸附柱CB2放回收集管中,12000rpm離心2min,盡量除去漂洗液。将吸附柱CB2室溫放置數分(fēn)鐘(zhōng),徹底晾幹。
(7)将吸附柱CB2放入一個(gè)幹淨的(de)離心管中,向吸附膜中間位置懸空滴加适量的(de)洗脫緩沖液EB,室溫放置2min。
(8)12000rpm離心2min,收集DNA溶液。