由于細胞壁等因素的(de)限制，植物(wù)的(de)單細胞研究要稍晚于動物(wù)領域，目前植物(wù)單細胞文章(zhāng)主要是針對(duì)少量單細胞轉錄組異質性的(de)研究，高(gāo)通(tōng)量水(shuǐ)平還(hái)未應用(yòng)到植物(wù)領域。2019年2月(yuè)4日，美(měi)國密歇根大(dà)學John Schiefelbein實驗室在線發表了(le)拟南(nán)芥高(gāo)通(tōng)量單細胞轉錄組（scRNA）研究文章(zhāng)，發表雜(zá)志爲Plant Physiology（IF=5.949），這(zhè)也(yě)是第一篇将10x Genomics scRNA測序應用(yòng)在植物(wù)中的(de)發表文獻。
植物(wù)10x Genomics scRNA-seq一個(gè)很大(dà)的(de)限制因素是無法獲得(de)高(gāo)活力的(de)原生質體，下(xià)面給出了(le)上述文獻中拟南(nán)芥根組織原生質體的(de)制備流程，供參考，實際操作時(shí)需要根據研究的(de)組織類型，對(duì)實驗條件進行優化(huà)，例如解離酶的(de)選擇、解離酶的(de)處理(lǐ)時(shí)間等。
1、溶液準備
清洗液：0.4 mM 甘露醇（Mannitol）、20mM MES (pH 5.7)、20 mM KCl、10mM CaCl2、0.1% (w/v) BSA；
酶解液：1.25% (w/v) 纖維素酶Cellulase("ONOZUKA" R-10, Yakult)、0.1% (w/v)果膠酶Pectolyase (P-3026, Sigma-Aldrich)、0.4 mM Mannitol、20mM MES (pH 5.7)、20 mM KCl、10mM CaCl2、0.1% (w/v) BSA。
2、原生質體懸液制備
1） 取拟南(nán)芥根尖，切碎，70-μm濾器過濾；
2） 置于35 mm培養皿中，加入酶解液；
3） 放入恒溫搖床（85 rpm），25°C酶解1h；
4） 500 g 離心10 min；
5） 離心，加入500 μL清洗液洗滌；
6） 40μm細胞濾器過濾原生質體懸液後，200g離心 6 min；
7） 清洗液重懸，确定原生質體濃度，冰上放置，可(kě)進行10x上機标記。
