藻膽色素既可(kě)作爲抗氧化(huà)劑應用(yòng)于食品、保健品領域，又可(kě)作爲熒光(guāng)探針應用(yòng)于疾病診斷和(hé)光(guāng)學治療領域，另外藻膽素還(hái)能夠有效地減少肝損傷，促進肝細胞的(de)增殖。藻膽素在細胞或者生命體内還(hái)可(kě)以被還(hái)原爲一種類似于膽紅素的(de)物(wù)質，能夠有效地抑制 NADPH氧化(huà)酶的(de)活性，進而可(kě)以減少或治療某些NADPH酶導緻的(de)疾病，因此藻膽色素具有廣闊的(de)應用(yòng)前景和(hé)巨大(dà)的(de)市場(chǎng)價值。
1、藻膽色素的(de)檢測與定量方法
采用(yòng)紫外分(fēn)光(guāng)光(guāng)度計及熒光(guāng)分(fēn)光(guāng)光(guāng)度計對(duì)其進行檢測和(hé)定量。藻膽色素具有共轭雙鍵體系，極易發生 π→π*，n→π*電子躍遷，因此可(kě)以利用(yòng)熒光(guāng)技術手段對(duì)其中的(de)藻藍膽素和(hé)藻紅膽素進行檢測。此外，藻藍膽素和(hé)藻紅膽素在特定的(de)溶液中具有特定的(de)吸收峰，從而可(kě)以根據吸收峰的(de)位置及吸光(guāng)度對(duì)其定性、定量分(fēn)析。
操作步驟如下(xià)：
① 藻藍膽素的(de)粗提：取 100 mL 的(de)菌液，8000 g，離心 10 min 收集菌體。所得(de)的(de)菌體用(yòng) 40 mL 甲醇在 50℃條件下(xià)，水(shuǐ)浴加熱(rè) 1~2 h，至菌體沉澱呈白色，8000 g，離心，10 min 取上清待用(yòng)；
② 特征吸收峰的(de)測定：①中所得(de)的(de)藻藍膽素的(de)甲醇溶液加入适量的(de)濃鹽酸（VCH3OH:VHCl=95:5），測其紫外可(kě)見光(guāng)吸收曲線；
③ 樣品濃度的(de)計算(suàn)：c(mM)=A680/37.9×稀釋倍數；
④ ①中藻藍膽素的(de)甲醇溶液，測其紫外可(kě)見光(guāng)吸收曲線，并根據吸收曲線測定其熒光(guāng)發射光(guāng)譜。
2.實驗用(yòng)品
2.1．材料：菌種（E.coli，BL21）
2.2．器材和(hé)儀器：精準天平、紫外分(fēn)光(guāng)光(guāng)度計、熒光(guāng)光(guāng)譜儀、pH計、紫外檢測儀、高(gāo)速離心機、低溫恒溫槽、振蕩培養箱、淨化(huà)工作台、高(gāo)壓滅菌鍋
2.3．大(dà)腸杆菌培養基：
LB培養基（1L）：10g NaCl，10g胰蛋白胨，5g酵母浸粉，加去離子水(shuǐ)至1L。
TB培養基（1L）：将12g胰蛋白胨，24g酵母浸粉，4mL甘油溶于900mL去離子水(shuǐ)中，各組分(fēn)溶解後高(gāo)壓滅菌，冷(lěng)卻至60℃左右，再加100mL滅菌的(de)17mM KH2PO4和(hé)72mM K2HPO4的(de)溶液（2.31gKH2PO4和(hé)12.54gK2HPO4）
2.4．抗生素儲備液
卡納黴素儲備液：用(yòng)無菌二次重蒸水(shuǐ)配成10mg/mL卡那黴素（kanamycin，簡稱Kan）溶液，分(fēn)裝，-20°C保存備用(yòng)。使用(yòng)時(shí)每毫升培養基加入3～5mL，終濃度爲30～50mg/mL。
3、實驗流程
3.1 活化(huà)菌種：取保藏的(de)工程菌菌種10 µl接入裝有5 ml的(de)LB液體培養基的(de)試管（不同的(de)藻膽蛋白生物(wù)合成需要不同的(de)抗生素）中，于37℃搖床振蕩培養8-12小時(shí)。
3.2 擴大(dà)培養：将試管中活化(huà)的(de)1 ml菌液接種到250 ml LB培養基，同時(shí)加入對(duì)應的(de)抗生素，培養基于37℃搖床振蕩培養。
3.3 色素蛋白生物(wù)合成：工程菌培養至OD600約爲0.5-0.6，10℃水(shuǐ)浴中放置1 hr，加入IPTG至終濃度爲1mmol/L，20℃低溫過夜誘導後離心收集細胞，二次蒸餾水(shuǐ)洗兩次。
3.4 離心：把菌體從發酵液裏離心出來(lái)。
第一次離心
（1）首先電子秤取50g菌液到離心管内
（2）将離心管放入離心機中
第二次離心
讓菌泥集中到一塊兒(ér)，方便取上清液
3.5 光(guāng)譜分(fēn)析 吸收光(guāng)譜用(yòng)紫外可(kě)見光(guāng)譜儀，紫外可(kě)見光(guāng)譜掃描範圍300～800nm，掃描速度960nm/min，狹縫寬度1.0nm。熒光(guāng)光(guāng)譜用(yòng)熒光(guāng)光(guāng)譜儀，熒光(guāng)光(guāng)譜掃描速度1200nm/min ,狹縫寬度5.0nm。
4、結果分(fēn)析
藻藍膽素在酸性甲醇溶液中，于680 nm 處的(de)吸收峰是藻藍膽素的(de)特征吸收峰，藻紅膽素在酸性甲醇溶液中，于440nm處的(de)吸收峰是藻紅膽素的(de)特征吸收峰。
