2.1 枯草(cǎo)芽孢杆菌生長(cháng)條件測定
枯草(cǎo)芽孢杆菌屬于細菌的(de)一科，屬于厚壁菌門，在發酵飼料中芽孢杆菌主要發揮兩大(dà)作用(yòng)，一方面是提高(gāo)飼料的(de)消化(huà)性和(hé)營養價值，另一方面是産生抗菌肽和(hé)細菌素抑制有害菌的(de)生長(cháng)和(hé)腐敗作用(yòng)，芽孢杆菌不僅可(kě)以促進多(duō)糖、澱粉和(hé)蛋白質的(de)水(shuǐ)解，還(hái)可(kě)以促進共生的(de)乳酸菌生長(cháng)，具調查攝食枯草(cǎo)芽孢杆菌飼料的(de)動物(wù)發育良好，血清中溶菌酶水(shuǐ)平提高(gāo)，緻使疾病率與死亡率均顯著下(xià)降。
通(tōng)過圖1、圖2 可(kě)以看出，随著(zhe)培養基pH 的(de)升高(gāo)，枯草(cǎo)芽孢杆菌的(de)菌濃度随之增加；随著(zhe)培養溫度的(de)提高(gāo)，枯草(cǎo)芽孢杆菌的(de)生長(cháng)速度明(míng)顯加快(kuài)，但OD值随之降低。根據菌種活力以及穩定性等多(duō)方面因素考慮，選擇30 ℃、pH7.0爲枯草(cǎo)芽孢杆菌的(de)最适條件。
2.2 乳酸菌生長(cháng)條件測定
乳酸菌同樣屬于細菌的(de)一個(gè)分(fēn)支厚壁菌門，乳酸菌是飼料中應用(yòng)最早、最廣泛的(de)菌類，在飼料中發揮以下(xià)作用(yòng)：産生抗菌素抑制和(hé)殺滅有害菌使其不能生長(cháng)繁殖，減少或殺滅有害物(wù)質，使動物(wù)體内毒素含量降低從而增強使原宿主抗異能力，增強在競争中占優勢；提高(gāo)飼料的(de)營養價值，在活菌體内和(hé)代謝産物(wù)中含有較高(gāo)的(de)超氧化(huà)物(wù)歧化(huà)酶可(kě)以增強動物(wù)的(de)體液免疫和(hé)細胞免疫；将糖類分(fēn)解改善物(wù)料風味和(hé)适口性。
通(tōng)過圖3、圖4 可(kě)以看出，在32 ℃和(hé)35 ℃培養溫度下(xià)，乳酸菌的(de)生長(cháng)速率相差不大(dà)，在37 ℃時(shí)，乳酸菌生長(cháng)速率明(míng)顯增高(gāo)，但最終OD 值略低于采用(yòng)35 ℃進行培養；在不同pH培養基環境下(xià)，前期菌液的(de)OD 值并未呈現出非常明(míng)顯的(de)差别，但随著(zhe)培養時(shí)間的(de)延長(cháng)，高(gāo)pH 的(de)試驗組OD 值開始呈現不同程度的(de)下(xià)降趨勢。根據菌種活力以及穩定性等多(duō)方面因素考慮，選擇35 ℃、pH5.0爲乳酸菌的(de)最适條件。
2.3 玉米稭稈與豆粕混合發酵參數測定
由于試驗因素較多(duō)，對(duì)全部因子進行交互試驗，費時(shí)費力，因此，利用(yòng)minitab 軟件進行輔助，設計部分(fēn)因子試驗，以之前試驗出的(de)乳酸菌和(hé)枯草(cǎo)芽孢杆菌最适生長(cháng)條件爲界限，拟定試驗因子爲pH(最小值5.0、最大(dà)值7.0)、溫度(最小值30 ℃、最大(dà)值35 ℃)、水(shuǐ)分(fēn)(最小值35%、最大(dà)值40%)、乳酸菌接種量(最小值1‰、最大(dà)值5‰)、枯草(cǎo)芽孢杆菌接種量(最小值1‰、最大(dà)值5‰)，具體設計如下(xià)：每個(gè)試驗組重複進行三次試驗，在發酵過程第1、3、7、15 d分(fēn)别對(duì)各試驗組取樣進行顔色、氣味、酸度、水(shuǐ)分(fēn)、微生物(wù)數量等檢測、并根據各試驗組發酵水(shuǐ)平，進行綜合評定，将綜合評定值平均平均數返回設計軟件，通(tōng)過回歸方程，經層層删減，計算(suàn)各因子影(yǐng)響性（表1-2）。
通(tōng)過軟件計算(suàn)，得(de)出模型及回歸方程，其R-sq=99.63%、R-sq（調整）=99.06%，說明(míng)删去所有影(yǐng)響不顯著項後的(de)模型結構較好，回歸方程具有較好的(de)預測能力。其控制方程式（精簡模式）如下(xià)：綜合評定值=6.2062+0.1812 水(shuǐ)分(fēn)-0.0312pH+0.1438 溫度 +0.9313 乳酸菌接種量-0.6187 枯草(cǎo)芽孢杆菌接種量-0.1812水(shuǐ)分(fēn)×溫度-0.0813pH×乳酸菌接種量+0.1937pH×枯草(cǎo)芽孢杆菌接種量-0.1063溫度×枯草(cǎo)芽孢杆菌接種量（圖5）。
通(tōng)過效應Pareto 可(kě)以看出，試驗的(de)關鍵因子爲D、E、BE、A、AC、C、CE、BD，即乳酸菌接種量、枯草(cǎo)芽孢杆菌接種量、pH×枯草(cǎo)芽孢杆菌接種量、水(shuǐ)分(fēn)、水(shuǐ)分(fēn)×溫度、溫度、溫度×枯草(cǎo)芽孢杆菌接種量、pH×乳酸菌接種量（圖6）。
通(tōng)過主效應圖可(kě)以看出，乳酸菌接種量和(hé)枯草(cǎo)芽孢杆菌接種量的(de)斜率較大(dà)，說明(míng)其對(duì)發酵的(de)影(yǐng)響顯著，水(shuǐ)分(fēn)、溫度、pH的(de)斜率較爲平緩，說明(míng)其對(duì)發酵的(de)影(yǐng)響不顯著。因子的(de)重要順序爲D＞E＞A＞C＞B（乳酸菌接種量＞枯草(cǎo)芽孢杆菌接種量＞水(shuǐ)分(fēn)＞溫度＞pH）。
通(tōng)過交互作用(yòng)圖可(kě)以看出，水(shuǐ)分(fēn)與pH、水(shuǐ)分(fēn)與溫度之間存在著(zhe)一定的(de)交互作用(yòng)外，其餘因子間不存在明(míng)顯的(de)交互作用(yòng)關系（圖7-8）。
通(tōng)過相應優化(huà)器，利用(yòng)控制方程式對(duì)數據進行計算(suàn)，得(de)出最佳操作水(shuǐ)平爲pH 5.5、溫度35 ℃、配料水(shuǐ)分(fēn)40%、乳酸菌接種量5‰、枯草(cǎo)芽孢杆菌接種量1‰。
采用(yòng)最佳操作水(shuǐ)平數據對(duì)進行試驗，以驗證結果的(de)穩定性，通(tōng)過試驗發現，在發酵15 d時(shí)，飼料具氣味芳香，顆粒松散，乳酸菌活菌數＞4×107CFU/g，枯草(cǎo)芽孢杆菌活菌數＞2×107 CFU/g最終評價值爲8.9，優于其他(tā)試驗組。
由于研究方向以及設備儀器的(de)原因，本次實驗主要對(duì)發酵飼料感官評價及益生菌數量，進行了(le)比較，并未對(duì)發酵前後的(de)小肽類、氨基酸類等微量營養成分(fēn)，以及飼料的(de)消化(huà)能。代謝能等進行詳細檢測，後續我們将對(duì)飼料發酵前後小肽、氨基酸、微量元素的(de)變化(huà)，并開展動物(wù)飼喂研究，以找出最優發酵方案。
結 論
經過初步研究，采用(yòng)pH5.5、溫度35 ℃、配料水(shuǐ)分(fēn)40%、乳酸菌接種量5‰、枯草(cǎo)芽孢杆菌接種量1‰作爲工藝條件進行發酵時(shí)，能獲得(de)較高(gāo)的(de)益生菌數量和(hé)較優的(de)感官評價結果，發酵效果較好。
